蛋白純化系統(tǒng)、超微量核酸蛋白測(cè)定儀、化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)、凝膠成像分析系統(tǒng)、雙光束核酸蛋白檢測(cè)儀、紫外分析儀、紫外檢測(cè)儀、恒流泵、自動(dòng)部分收集器等為**的十幾個(gè)產(chǎn)品系列
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蛋白純化常見問題（一）
日期：2024-11-25 15:32
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摘要：蛋白純化常見問題（一）
那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下蛋白純化常見問題（一）。
Q：如何去除樣品中的 DNA/RNA 等核酸雜質(zhì)污染？
A：延長(zhǎng)超聲時(shí)間以降低粘度。也可以使用核酸酶如 Benzonase 同時(shí)消化 DNA 和 RNA。如果來源是大腸桿菌裂解液，含有大量的DNA，可以用鏈霉素沉淀等方法，預(yù)先去除大量的 DNA。
通過層析方法去除 ：由于核酸帶負(fù)電，在陰離子柱上會(huì)結(jié)合或陽離子柱上流穿，也可以有效去除核酸。
去除填料上結(jié)合的核酸 ：一般采用 1M NaOH + 1M NaCl 對(duì)核酸的去除效果較好。如果核酸的吸附過強(qiáng)，會(huì)采用強(qiáng)烈的方法，3M NaCl可去除靠靜電吸附的核酸，然后用 1M NaOH分解核酸，之后再用 3M NaCl 清洗。
Q：柱子有色素如何去除？
A：
色素性質(zhì)較復(fù)雜，可以根據(jù)填料的耐受情況，嘗試使用高鹽、NaOH、有機(jī)溶劑（如 30% 異丙醇或乙醇）或酸（如 0.01 M HCl）處理，*好將填料拆出，分別浸泡在不同試劑中。
也可以考慮使用混合試劑進(jìn)行處理，例如：通過混合8M尿素 + 0.5 M 乙酸 + 2 M NaCl，對(duì)于和陰離子交換等介質(zhì)緊密結(jié)合的化合物，通常很有效；或者1 M NaOH混合1-2 M 鹽；可以耐受有機(jī)溶劑的情況下，嘗試1 M NaOH混合20-30%的異丙醇；根據(jù)色素的不同性質(zhì)，也可以嘗試不同的去污劑，注意避免操作中產(chǎn)生氣泡。
如果去除不掉，可以定期把色素污染部分的填料去除，或驗(yàn)證是否對(duì)于樣品純化造成影響。
Q：柱子堵了、超壓如何處理？
A：可能原因 ：緩沖液或樣品未進(jìn)行過濾、蛋白沉淀或雜質(zhì)殘留、清洗不及時(shí)等引起層析柱濾膜堵塞 ；流速過快、流動(dòng)相粘度 ( 如乙醇等 ) 過高、溫度過低。
建議處理方法 ：首先將柱子卸下來，確定是系統(tǒng)還是柱子堵了。如果是柱子堵了 ：參考說明書 CIP 操作進(jìn)行清潔 ；更換層析柱頂端濾膜或超聲清洗 (Hitrap，HiPrep 與 Precision Columns 3.2/300 柱型均不能拆卸換膜 ) ；必要時(shí)移除層析柱頂端 2-3mm 凝膠，調(diào)節(jié) Adaptor消除頂端死體積。部分預(yù)裝柱，也可以將填料倒出，去除板結(jié)或碎填料后，重新裝填。測(cè)定柱效或重復(fù)之前做過的樣品。后續(xù)注意樣品前處理（包括上柱子前的離心或過濾處理、優(yōu)化利于樣品穩(wěn)定存在的緩沖液條件、核酸等粘稠雜質(zhì)的去除等）以及層析柱的日常維護(hù)。
以上就是上海嘉鵬科技有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于蛋白純化常見問題（一）。
我們上海嘉鵬科技有限公司是專業(yè)生產(chǎn)超蛋白純化系統(tǒng)、超微量核酸蛋白測(cè)定儀、化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)、凝膠成像分析系統(tǒng)、紫外分析儀、核酸蛋白檢測(cè)儀、紫外檢測(cè)儀、光化學(xué)反應(yīng)儀、旋渦混合器、恒流泵、自動(dòng)部分收集器等為**的十幾個(gè)產(chǎn)品系列的廠家，歡迎大家前來訂購
Q：如何去除樣品中的 DNA/RNA 等核酸雜質(zhì)污染？
A：延長(zhǎng)超聲時(shí)間以降低粘度。也可以使用核酸酶如 Benzonase 同時(shí)消化 DNA 和 RNA。如果來源是大腸桿菌裂解液，含有大量的DNA，可以用鏈霉素沉淀等方法，預(yù)先去除大量的 DNA。
通過層析方法去除 ：由于核酸帶負(fù)電，在陰離子柱上會(huì)結(jié)合或陽離子柱上流穿，也可以有效去除核酸。
去除填料上結(jié)合的核酸 ：一般采用 1M NaOH + 1M NaCl 對(duì)核酸的去除效果較好。如果核酸的吸附過強(qiáng)，會(huì)采用強(qiáng)烈的方法，3M NaCl可去除靠靜電吸附的核酸，然后用 1M NaOH分解核酸，之后再用 3M NaCl 清洗。
Q：柱子有色素如何去除？
A：
色素性質(zhì)較復(fù)雜，可以根據(jù)填料的耐受情況，嘗試使用高鹽、NaOH、有機(jī)溶劑（如 30% 異丙醇或乙醇）或酸（如 0.01 M HCl）處理，*好將填料拆出，分別浸泡在不同試劑中。
也可以考慮使用混合試劑進(jìn)行處理，例如：通過混合8M尿素 + 0.5 M 乙酸 + 2 M NaCl，對(duì)于和陰離子交換等介質(zhì)緊密結(jié)合的化合物，通常很有效；或者1 M NaOH混合1-2 M 鹽；可以耐受有機(jī)溶劑的情況下，嘗試1 M NaOH混合20-30%的異丙醇；根據(jù)色素的不同性質(zhì)，也可以嘗試不同的去污劑，注意避免操作中產(chǎn)生氣泡。
如果去除不掉，可以定期把色素污染部分的填料去除，或驗(yàn)證是否對(duì)于樣品純化造成影響。
Q：柱子堵了、超壓如何處理？
A：可能原因 ：緩沖液或樣品未進(jìn)行過濾、蛋白沉淀或雜質(zhì)殘留、清洗不及時(shí)等引起層析柱濾膜堵塞 ；流速過快、流動(dòng)相粘度 ( 如乙醇等 ) 過高、溫度過低。
建議處理方法 ：首先將柱子卸下來，確定是系統(tǒng)還是柱子堵了。如果是柱子堵了 ：參考說明書 CIP 操作進(jìn)行清潔 ；更換層析柱頂端濾膜或超聲清洗 (Hitrap，HiPrep 與 Precision Columns 3.2/300 柱型均不能拆卸換膜 ) ；必要時(shí)移除層析柱頂端 2-3mm 凝膠，調(diào)節(jié) Adaptor消除頂端死體積。部分預(yù)裝柱，也可以將填料倒出，去除板結(jié)或碎填料后，重新裝填。測(cè)定柱效或重復(fù)之前做過的樣品。后續(xù)注意樣品前處理（包括上柱子前的離心或過濾處理、優(yōu)化利于樣品穩(wěn)定存在的緩沖液條件、核酸等粘稠雜質(zhì)的去除等）以及層析柱的日常維護(hù)。
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