植物染色體DNA的抽取及濃度測(cè)定說(shuō)明

 
、原理
植物組織中大部分是核DNA，它和組蛋白、非組蛋白結(jié)合在起，以核蛋白的形式存在于細(xì)胞核內(nèi)。CTAB：是種陽(yáng)離子去污劑，
可溶解細(xì)胞膜，它能與核酸形成復(fù)合物，在鹽溶劑中(0.7mol/L NaCl)是可溶的，當(dāng)降低溶劑鹽的濃度到定程度(0.3mol/L NaCl)
時(shí)從溶劑中沉淀，通過(guò)離心就可將CTAB與核酸的復(fù)合物同蛋白、多糖類物質(zhì)分開(kāi)，然后將CTAB與核酸的復(fù)合物沉淀溶解于鹽溶劑中，
再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇中。
在DNA提取過(guò)程中必須始終注意以下幾個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題：
（1）DNA的結(jié)構(gòu)和雙鏈易受多種因素的影響引起雙鏈解開(kāi)，即“變性”，因此抽提時(shí)避免使用變性的條件。
（2）抑制內(nèi)外源DNase的活力。DNase就象把刀，它能把大分子的DNA切成碎片，所以要加以杜，現(xiàn)可以通過(guò)多種途徑來(lái)做到這點(diǎn)：a、
低溫操作；b、調(diào)節(jié)pH，使偏堿（pH8.0）；c、抽提液中加表面活性劑；d、加螯合劑（EDTA）除去酶的鋪助因子（Mg2+），使酶活性喪失。
（3）防止化學(xué)降解。如過(guò)酸或過(guò)堿以及其它化學(xué)因素，會(huì)使DNA降解，般綜合考慮，取pH8.0左右為宜。
（4）防止物理因素降解。如溫度太或機(jī)械張力剪切等，DNA分子特別大，其分子量可達(dá)1012道爾頓，易被機(jī)械張力拉斷，甚至在細(xì)管中稍急
些的流動(dòng)也會(huì)使DNA斷裂，所以在抽提過(guò)程中要特別注意這點(diǎn)，操作過(guò)程要盡量簡(jiǎn)便、溫和、減少攪拌次數(shù)，也不要?jiǎng)×覔u動(dòng)。
（5）植物的次生代謝物對(duì)核酸提取有干擾作用。因此，般盡可能選幼嫩的、代謝旺盛的新生組織作為提取DNA的材料，這是因幼嫩的新生組織
次生代謝物較少，DNA含量，且易于破碎，植物材料好是新鮮的。
分離提取植物DNA的方法很多，本實(shí)驗(yàn)采用CTAB法提取DNA并通過(guò)紫外吸收法和電泳鑒定。