電泳帶型分析

帶型

原因分析

解決辦法

弱帶或無帶

上樣的DNA量不夠

增加DNA的上樣量，聚丙烯酰胺凝膠電泳比瓊脂糖電泳靈敏度稍高

DNA降解

避免DNA的核酸酶污染

電泳時(shí)間過長，DNA跑出

減短電泳時(shí)間，降低電壓，增強(qiáng)凝膠濃度

EB染色的DNA，紫外光源不合適

應(yīng)用短波長（254nm），增強(qiáng)紫外燈靈敏度

DNA帶缺失

小DNA帶走出凝膠

減短電泳時(shí)間，降低電壓，增強(qiáng)凝膠濃度

分子大小相近的DNA帶不易分辨

增加電泳時(shí)間，核準(zhǔn)正確的凝膠濃度

DNA 變性

電泳前請勿高溫加熱DNA鏈，以20mM NaCl Buffer稀釋DNA

巨大DNA鏈，凝膠電泳不合適

在脈沖凝膠電泳上分析

DNA帶模糊

DNA降解

避免核酸酶污染

DNA上樣量過多

減少凝膠中DNA上樣量

所用電泳條件不合適

電泳時(shí)電壓不應(yīng)超過20V/cm，溫度＜30℃,巨大DNA鏈，溫度應(yīng)＜15℃，核查所用電泳緩沖液是否有足夠的緩沖能力

DNA樣含鹽過高

電泳前通過乙醇沉淀去除過多的鹽

有蛋白污染

電泳前酚抽提去除蛋白

DNA變性

電泳前勿加熱，用20mM NaCl緩沖液稀釋DNA

不規(guī)則DNA帶遷移

對于λ/Hind III片段COS位點(diǎn)復(fù)性

電泳前加熱DNA 65℃加熱5-10分鐘，然后在冰上冷卻5分鐘

電泳條件不合適

電泳電壓不超過20V/cm，溫度＜30℃，電泳緩沖液有足夠的緩沖能力

DNA變性

以20mM NaCl Buffer稀釋DNA，電泳前勿加熱