植物基因組DNA提取、酶切及電泳分析

那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下關(guān)于植物基因組DNA提取、酶切及電泳分析：

一、目的

掌握植物基因組DNA提取的一般方法及注意事項(xiàng)。大分子量DNA分子的酶切分析。

二、原理

十六烷基三乙基溴化胺是一種去污劑，可溶解細(xì)胞膜，它能與核酸形成復(fù)合物，在高鹽溶液中（0.7mol/L NaCl）是可溶的，當(dāng)降低溶液鹽濃度到一定程度(0.3

mol/L

NaCl)時(shí)，從溶液中沉淀，通過離心就可將CTAB與核酸的復(fù)合物同蛋白質(zhì)、多糖類物質(zhì)分開，然后將CTAB與核酸的復(fù)合物沉淀溶解于高鹽溶液，再加乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇。

三、試劑與器材

（一）、試劑

1 、DNA extraction ：500ml

31.885g sorbitol (山梨醇)

6.05g tris PH8.2 (一般不調(diào))

2、Nuclei lysis buffer: 500ml

100ml 1M Tris PH7.5

100ml 0.25M EDTA

200ml 5M NaCl

10g CTAB

100ml ddH2O

3、5% sarkosyl (N-月桂酰肌氨基鈉鹽) 500ml

用時(shí)，將上述三種溶液按1：1：0.4 比例混勻，加入亞硫酸氫鈉（3.8g/l），65℃預(yù)熱，既為抽提液。

（二）器材

恒溫水浴、研缽、電泳設(shè)備

四、操作步驟

（一）、基因組DNA提取

1 取0.15g左右小麥葉片，在液氮中研磨后放入1.5ml離心管中，加入700ml抽體液（65℃預(yù)熱）混勻，放入65℃水浴中，裂解40-60分鐘，期間溫和混勻幾次。

2 取出裂解好的DNA ，加入700ml氯仿：異戊醇（24：1），猛烈混勻，離心（1000rpm，10分鐘）。

3 取上清于新管中，（不要混入氯仿），加入0.8-1倍預(yù)冷異丙醇，緩慢混勻后，再猛烈混勻，使DNA成團(tuán)，-20℃放半小時(shí)以上。

4 將析出的DNA 離心，14000rpm，10分鐘。

5 去掉上清，將沉淀用1ml 70% 乙醇清洗一次，離心 干燥，溶于50ml ddH2O。

（二）、酶切及電泳分析

取四支1.5ml離心管，分別寫上標(biāo)記：g/EcoRⅠ（學(xué)號(hào)）、g/HindⅢ（學(xué)號(hào)）、λ/EcoRⅠ（學(xué)號(hào)）和λ/ Hind Ⅲ（學(xué)號(hào)）。

前兩支試管加入30 ml基因組DNA。后兩支試管加入3mlλ基因組DNA。

前兩支加入5 ml 10×buffer。后兩支加入2ml 10×buffer。

前兩支分別加入ddH2O 12.5ml，后兩支分別加入ddH2O 13ml

分別加入RNase 1 ml。

前兩支試管分別加入1.5 ml EcoRⅠ和Hind Ⅲ，10000rpm離心20 S混勻。前兩支試管分別加入1 ml EcoRⅠ和Hind

Ⅲ，10000rpm離心20 S混勻。

37℃反應(yīng)4h

0.8%瓊脂糖凝膠電泳（樣品全部點(diǎn)樣）。

觀察記錄并分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果

以上就是上海嘉鵬科技有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于植物基因組DNA提取、酶切及電泳分析。

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