淺談層析實驗中的氣泡問題（二）

       說到氣泡，你可能會聯(lián)想到酣暢淋漓的可樂，通透上頭的啤酒，亦或是流光飛舞的浪漫，生活中的氣泡，似乎還帶有那么一絲美好，然而對于實驗來說，尤其是在大多不會配置在線脫氣單元的FPLC系統(tǒng)上做的層析實驗，氣泡就如煩人的蒼蠅，鞋里的石子，令人如鯁在喉不吐不快，如若是重要樣品、昂貴填料，氣泡帶來的實驗失敗那簡直是小型災難現(xiàn)場。那么氣泡是源自何來，而又去之何處，怎么能讓它們從我們的系統(tǒng)里消失，以下此篇，做一個小小探討，拋磚引玉，共謀對策而滅之。

Fig.1 氣泡造成的UV雜峰

Fig.2 氣泡造成的系統(tǒng)壓力波動

這些癥狀基本能覆蓋大部分的層析實驗問題，可見氣泡的破壞力和惱人程度，知己知彼方才能有的放矢，那么氣泡是如何形成的呢？流動相中氣體形成的原因有多種，*根本的還是由于氣體在液體中達到過飽和狀態(tài)；平衡狀態(tài)時溶解空氣的量與溶液的性質、氣體的種類有關，也與外界條件有關, 主要的外界條件有以下 3 種。

● 層析儀的緩沖進口一般都有濾網(wǎng)設計，如果濾網(wǎng)維護清潔不到位，濾網(wǎng)雜質過多或者長菌造成液體通量不足，在較高的流速情況下，管路內部的壓力急劇降低，此時氣泡將會閃亮登場，帶來波浪般的圖譜波動；因此實驗之前需要檢查系統(tǒng)緩沖液進口濾頭的清潔情況，如有雜質需立刻清洗去除。

Fig.3 緩沖液進口濾頭篩網(wǎng)

● 配置緩沖液時的氣壓高（氣溫，濕度，天氣和海拔都會影響大氣壓），瓶子擰緊后保存，如果實驗時的氣壓有變化，在打開緩沖液進行實驗時，就會帶入析出的氣泡，因此，預配置緩沖液的脫氣就非常重要。
● 系統(tǒng)中的不同管徑流路的轉換，帶來通量的改變，比如細管轉粗管，在高流速情況下，由于通量的驟升，形成局部負壓，容易引發(fā)氣泡的析出或漏入，所以系統(tǒng)管徑的使用要盡量避免細管轉粗管，如果實驗必須，則要注意避免使用高流速。
● 低壓梯度時，由于低壓梯度單元部位的壓力略低于大氣壓，且混合室多裝在泵后（高壓側），但實際混合在低壓側就開始了，所以，低壓梯度比混合發(fā)生在泵后的高壓梯度容易產(chǎn)生氣泡。（常規(guī)單泵二或四通道的均為低壓混合模式）
● 色譜柱中的壓力一般較高，氣體溶解度增大，一般在柱中不易產(chǎn)生氣泡。然而，在接近柱的出口處，壓力相對較低，柱體填料的進出口壓差會很大，此時流動相里溶解的氣泡由于壓力差，極易在填料中析出，影響柱效，甚至損壞填料，因此系統(tǒng)里會配置反壓裝置（如背壓閥），給柱后施加一定的反壓，降低柱內壓差，從而避免氣泡的析出。

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