蛋白純化系統(tǒng)、超微量核酸蛋白測定儀、化學發(fā)光成像系統(tǒng)、凝膠成像分析系統(tǒng)、雙光束核酸蛋白檢測儀、紫外分析儀、紫外檢測儀、恒流泵、自動部分收集器等為**的十幾個產(chǎn)品系列
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熒光定量PCR儀的誤區(qū)
日期：2024-10-22 22:54
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摘要：熒光定量PCR 因操作方便、運行速度快、實驗結(jié)果準確，受到越來越多的分子生物學研究者青睞。在實驗技術(shù)成熟的今天，也許對你來說，難得不是實驗技術(shù)上的問題——而是選擇哪種熒光定量PCR儀——你要征詢實驗室成員的意見、分析實驗室目前乃至將來的需求、平衡實驗室的預算，更要詳細研究各種富誘惑力的宣傳資料。面對各種不同性能的產(chǎn)品，您又該如何選擇呢？
先建議大走出認識熒光定量PCR的兩個誤區(qū)：
誤區(qū)：儀器通道越多越好
隨著PCR技術(shù)的成熟運用，多重擴增越來越熱鬧，熒光定量PCR儀也不能幸免。從初ABI公司推出...
熒光定量PCR 因操作方便、運行速度快、實驗結(jié)果準確，受到越來越多的分子生物學研究者青睞。在實驗技術(shù)成熟的今天，也許對你來說，難得不是實驗技術(shù)上的問題——而是選擇哪種熒光定量PCR儀——你要征詢實驗室成員的意見、分析實驗室目前乃至將來的需求、平衡實驗室的預算，更要詳細研究各種富誘惑力的宣傳資料。面對各種不同性能的產(chǎn)品，您又該如何選擇呢？
先建議大走出認識熒光定量PCR的兩個誤區(qū)：
誤區(qū)：儀器通道越多越好
隨著PCR技術(shù)的成熟運用，多重擴增越來越熱鬧，熒光定量PCR儀也不能幸免。從初ABI公司推出的單通道熒光定量PCR儀發(fā)展到如今各個廠都推出4通道、5通道甚至6通道熒光定量PCR儀，眼花繚亂的選擇讓人無所適從，就有人不小心走進了“通道越多越好”的誤區(qū)。
在使用有些廠5通道的熒光定量儀時，為了確保實驗結(jié)果的性和準確性都要在實驗中使用ROX（種熒光染料）或?qū)Ｓ玫腞eference dye ，這些熒光染料都必須單獨使用個檢測通道。這樣以來，真正能檢測多重PCR熒光信號的有效通道只有4個，而且使用校正染料可能會增加后期的使用成本。有的熒光定量PCR的檢測通道是只為自已廠的專用的熒光染料或試劑開放的，有效檢測通道也非像宣傳資料**稱的那么多。在購買前確認熒光定量PCR儀器的有效檢測通道尤為重要，不能單單只聽宣傳。
考慮多重熒光定量PCR的通道數(shù)的時候也應該從實驗室實際情況出發(fā)，多重PCR并非人人適用、人人可用，因為它使實驗復雜化了。
誤區(qū)：real-time PCR儀無需梯度功能
對于使用染料法的定量PCR反應，雖然有各種各樣的PCR引物設計軟件或者經(jīng)驗公式計算熔解溫度（Tm值），但運用的公式不同、引物序列不同，Tm值的差異會很大。引物的熔解溫度決定了退火溫度。而且模版中堿基的組合千變?nèi)f化，對于特殊片斷，經(jīng)驗公式得到的數(shù)據(jù)不定能得出準確的結(jié)果，退火溫度細微的差異對結(jié)果都可能產(chǎn)生決定性的影響，因而“摸條件”度是讓人很頭疼的問題。梯度PCR的出現(xiàn)部分解決了些問題——在反應過程中每個孔的溫度控制條件可以在指定范圍內(nèi)按照梯度變化，根據(jù)結(jié)果，步就可以摸索出適合的反應條件。
不單退火溫度，連變性溫度和延伸溫度都可以化——對于多種聚合酶混合酶擴增如Invitrogen、Clontech、Promega的多數(shù)保真Taq酶來說這個非常重要，因為Taq和校正酶的反應溫度可能有顯著差異，化延伸溫度就顯得很重要。
使用有梯度功能的熒光定量PCR可以次完成以往多次實驗才能完成的化過程，簡化了摸索 PCR反應條件的繁瑣實驗，既節(jié)省實驗時間提效率，又節(jié)省實驗成本。
先建議大走出認識熒光定量PCR的兩個誤區(qū)：
誤區(qū)：儀器通道越多越好
隨著PCR技術(shù)的成熟運用，多重擴增越來越熱鬧，熒光定量PCR儀也不能幸免。從初ABI公司推出的單通道熒光定量PCR儀發(fā)展到如今各個廠都推出4通道、5通道甚至6通道熒光定量PCR儀，眼花繚亂的選擇讓人無所適從，就有人不小心走進了“通道越多越好”的誤區(qū)。
在使用有些廠5通道的熒光定量儀時，為了確保實驗結(jié)果的性和準確性都要在實驗中使用ROX（種熒光染料）或?qū)Ｓ玫腞eference dye ，這些熒光染料都必須單獨使用個檢測通道。這樣以來，真正能檢測多重PCR熒光信號的有效通道只有4個，而且使用校正染料可能會增加后期的使用成本。有的熒光定量PCR的檢測通道是只為自已廠的專用的熒光染料或試劑開放的，有效檢測通道也非像宣傳資料**稱的那么多。在購買前確認熒光定量PCR儀器的有效檢測通道尤為重要，不能單單只聽宣傳。
考慮多重熒光定量PCR的通道數(shù)的時候也應該從實驗室實際情況出發(fā)，多重PCR并非人人適用、人人可用，因為它使實驗復雜化了。
誤區(qū)：real-time PCR儀無需梯度功能
對于使用染料法的定量PCR反應，雖然有各種各樣的PCR引物設計軟件或者經(jīng)驗公式計算熔解溫度（Tm值），但運用的公式不同、引物序列不同，Tm值的差異會很大。引物的熔解溫度決定了退火溫度。而且模版中堿基的組合千變?nèi)f化，對于特殊片斷，經(jīng)驗公式得到的數(shù)據(jù)不定能得出準確的結(jié)果，退火溫度細微的差異對結(jié)果都可能產(chǎn)生決定性的影響，因而“摸條件”度是讓人很頭疼的問題。梯度PCR的出現(xiàn)部分解決了些問題——在反應過程中每個孔的溫度控制條件可以在指定范圍內(nèi)按照梯度變化，根據(jù)結(jié)果，步就可以摸索出適合的反應條件。
不單退火溫度，連變性溫度和延伸溫度都可以化——對于多種聚合酶混合酶擴增如Invitrogen、Clontech、Promega的多數(shù)保真Taq酶來說這個非常重要，因為Taq和校正酶的反應溫度可能有顯著差異，化延伸溫度就顯得很重要。
使用有梯度功能的熒光定量PCR可以次完成以往多次實驗才能完成的化過程，簡化了摸索 PCR反應條件的繁瑣實驗，既節(jié)省實驗時間提效率，又節(jié)省實驗成本。