蛋白純化系統(tǒng)、超微量核酸蛋白測(cè)定儀、化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)、凝膠成像分析系統(tǒng)、雙光束核酸蛋白檢測(cè)儀、紫外分析儀、紫外檢測(cè)儀、恒流泵、自動(dòng)部分收集器等為**的十幾個(gè)產(chǎn)品系列
文章詳情
PCR新手指南系列：PCR產(chǎn)物電泳條帶分析
日期：2024-10-22 18:33
瀏覽次數(shù)：5859
摘要：PCR擴(kuò)增后般進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳分析，電泳后般有以下幾種條帶：
1、引物帶。引物濃度過或是擴(kuò)增效率不是特別時(shí)都會(huì)有，般不呈現(xiàn)為細(xì)帶，為發(fā)散狀；如果目的擴(kuò)增產(chǎn)物帶和引物帶都很亮，可以考慮適當(dāng)降低引物量。
2、引物聚體帶。比引物跑得慢點(diǎn)，條帶清晰，但如果擴(kuò)增產(chǎn)物小于100bp時(shí)，產(chǎn)物與引物聚體就不好分別了，建議采用DNA聚丙烯酰胺電泳（不是蛋白質(zhì)的SDS聚丙烯酰胺電泳）；如果引物聚體在化復(fù)性溫度后仍然嚴(yán)重影響目的產(chǎn)物的擴(kuò)增，先考慮更換引物設(shè)計(jì)（因?yàn)橐锖铣傻某杀颈确磸?fù)化條件的成本低）
3、...
PCR擴(kuò)增后般進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳分析，電泳后般有以下幾種條帶：
1、引物帶。引物濃度過或是擴(kuò)增效率不是特別時(shí)都會(huì)有，般不呈現(xiàn)為細(xì)帶，為發(fā)散狀；如果目的擴(kuò)增產(chǎn)物帶和引物帶都很亮，可以考慮適當(dāng)降低引物量。
2、引物聚體帶。比引物跑得慢點(diǎn)，條帶清晰，但如果擴(kuò)增產(chǎn)物小于100bp時(shí)，產(chǎn)物與引物聚體就不好分別了，建議采用DNA聚丙烯酰胺電泳（不是蛋白質(zhì)的SDS聚丙烯酰胺電泳）；如果引物聚體在化復(fù)性溫度后仍然嚴(yán)重影響目的產(chǎn)物的擴(kuò)增，先考慮更換引物設(shè)計(jì)（因?yàn)橐锖铣傻某杀颈确磸?fù)化條件的成本低）
3、目的擴(kuò)增產(chǎn)物帶。其大小與設(shè)計(jì)大小相同，條帶清晰。
4、非特異擴(kuò)增產(chǎn)物帶。其大小與設(shè)計(jì)大小不相同，條帶清晰。般考慮通過提復(fù)性溫度來減少或消除（也可用溫度梯度功能來尋找的復(fù)性溫度，東勝龍811型PCR儀就有此功能）。如果其片段大小比目的片段大較多，可以通過減少延伸時(shí)間來減少或消除（即不給它足夠的延伸時(shí)間）。還有種非特異擴(kuò)增產(chǎn)物帶是來自于逆轉(zhuǎn)錄PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)的基因組DNA的污染，如果目的擴(kuò)增產(chǎn)物中有內(nèi)含子，擴(kuò)增產(chǎn)物很可能大于目的基因。這種條帶通過化復(fù)性溫度是不能消除的，可以在逆轉(zhuǎn)錄前用無RNA酶的DNA酶進(jìn)行樣本處理。
1、引物帶。引物濃度過或是擴(kuò)增效率不是特別時(shí)都會(huì)有，般不呈現(xiàn)為細(xì)帶，為發(fā)散狀；如果目的擴(kuò)增產(chǎn)物帶和引物帶都很亮，可以考慮適當(dāng)降低引物量。
2、引物聚體帶。比引物跑得慢點(diǎn)，條帶清晰，但如果擴(kuò)增產(chǎn)物小于100bp時(shí)，產(chǎn)物與引物聚體就不好分別了，建議采用DNA聚丙烯酰胺電泳（不是蛋白質(zhì)的SDS聚丙烯酰胺電泳）；如果引物聚體在化復(fù)性溫度后仍然嚴(yán)重影響目的產(chǎn)物的擴(kuò)增，先考慮更換引物設(shè)計(jì)（因?yàn)橐锖铣傻某杀颈确磸?fù)化條件的成本低）
3、目的擴(kuò)增產(chǎn)物帶。其大小與設(shè)計(jì)大小相同，條帶清晰。
4、非特異擴(kuò)增產(chǎn)物帶。其大小與設(shè)計(jì)大小不相同，條帶清晰。般考慮通過提復(fù)性溫度來減少或消除（也可用溫度梯度功能來尋找的復(fù)性溫度，東勝龍811型PCR儀就有此功能）。如果其片段大小比目的片段大較多，可以通過減少延伸時(shí)間來減少或消除（即不給它足夠的延伸時(shí)間）。還有種非特異擴(kuò)增產(chǎn)物帶是來自于逆轉(zhuǎn)錄PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)的基因組DNA的污染，如果目的擴(kuò)增產(chǎn)物中有內(nèi)含子，擴(kuò)增產(chǎn)物很可能大于目的基因。這種條帶通過化復(fù)性溫度是不能消除的，可以在逆轉(zhuǎn)錄前用無RNA酶的DNA酶進(jìn)行樣本處理。
5、模板DNA帶。模板濃度過時(shí)可能出現(xiàn)。如果是基因組DNA為模板，條帶可能會(huì)很亂且較大。般進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，模板濃度都不要太大，否則會(huì)產(chǎn)生些比目的基因長(zhǎng)點(diǎn)的雜質(zhì)DNA（可能不成條帶，也看不到），這是由PCR擴(kuò)增原理造成的。
上海嘉鵬科技有限公司專業(yè)生產(chǎn)：紫外分析儀、三用紫外分析儀、暗箱式紫外分析儀、暗箱三用紫外分析儀、暗箱紫外分析儀、手提式紫外分析儀、三用紫外分析儀暗箱式、紫外檢測(cè)儀、部分收集器、恒流泵、蠕動(dòng)泵、凝膠成像系統(tǒng)、凝膠成像分析系統(tǒng)、化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng)、光化學(xué)反應(yīng)儀、旋渦混合器、漩渦混合器、玻璃層析柱、梯度混合器、梯度混合儀、核酸蛋白檢測(cè)儀、玻璃層析柱、熒光增白劑測(cè)定儀、餾分收集器、切膠儀、藍(lán)光切膠儀、層析系統(tǒng)等產(chǎn)品。歡迎來電咨詢。
上海嘉鵬科技有限公司 www.wzaoli.com
電話：021-66030766 36162366
400免費(fèi)咨詢電話：4000-123-925
手機(jī)：13585698333 18918199710 13501668369
企業(yè)QQ，2880150292，2880150293，2880150290，2880150297