示蹤染料在凝膠電泳中起什么作用

那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下關(guān)于示蹤染料在凝膠電泳中起什么作用：

凝膠電泳是一種常用的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，具有許多實(shí)際應(yīng)用，包括DNA指紋圖譜和基因組測(cè)序。該過(guò)程涉及使用電流分離DNA片段，同時(shí)跟蹤通過(guò)過(guò)濾凝膠的分子運(yùn)動(dòng)速率。

在無(wú)色DNA樣品中添加藍(lán)色或橙色跟蹤染料，可以查看樣品并獲得有關(guān)DNA分子在電泳過(guò)程中如何運(yùn)動(dòng)的信息。鑒定是基于分子遷移后凝膠上DNA條帶的大小。

凝膠電泳的工作原理

凝膠電泳使用電流將DNA片段拉過(guò)凝膠，以通過(guò)大小和電荷分離和鑒定DNA分子。這種凝膠通常由瓊脂糖粉制成，瓊脂糖粉是從海藻中提取的多糖。

將瓊脂糖添加到水和鹽的緩沖溶液中，并將混合物加熱和冷卻以制成多孔凝膠，該凝膠將在電泳過(guò)程中充當(dāng)過(guò)濾基質(zhì)。然后將凝膠置于電泳儀中，并用導(dǎo)電的緩沖溶液覆蓋。

將含有DNA和負(fù)載染料的溶液吸移到凝膠在凝膠制備過(guò)程中制備的小孔中。染料可 幫助您 清楚地看到要添加到電泳單元負(fù)極附近的凝膠孔中的樣品。

正電極位于另一端。將已知的DNA片段標(biāo)準(zhǔn)品放置在個(gè)孔中，該孔將創(chuàng)建一條DNA條帶，用于比較和鑒定。

DNA分子的磷酸骨架使DNA帶負(fù)電荷。因此，相反的分子會(huì)吸引，因此，DNA分子會(huì)被吸引到正極，并在通電時(shí)開(kāi)始移動(dòng)或“遷移”。

較小的DNA片段比較大的片段移動(dòng)得更快，因?yàn)樗鼈冊(cè)谕ㄟ^(guò)凝膠的多孔基質(zhì)遷移時(shí)遇到的阻力較小。大小相似的DNA片段在凝膠中形成DNA條帶。

加載染料的目的和重要性

DNA是無(wú)色的，因此在樣品中添加跟蹤染料有助于您確定電泳過(guò)程中凝膠中不同大小的蛋白質(zhì)分子的移動(dòng)速率。與DNA樣品一起移動(dòng)的加載染料的例子包括溴酚 藍(lán)和二甲苯基氰醇。

選擇的染料不應(yīng)具有反應(yīng)性或改變DNA。溴酚藍(lán)是一種染料，用于追蹤包含約400個(gè)堿基對(duì)的較小尺寸的DNA鏈，而二甲苯基氰醇更適合于具有多達(dá)8000個(gè)堿基對(duì)的較大的DNA鏈。選擇的染料不應(yīng)具有反應(yīng)性或改變DNA。

甘油在瓊脂糖凝膠電泳中的作用

在準(zhǔn)備進(jìn)行電泳的DNA樣品時(shí)，您將需要添加甘油和水以及加載染料。甘油是一種濃稠的糖漿物質(zhì)，在將DNA樣品插入凝膠板一端的孔中之前，會(huì)賦予DNA樣品更高的密度。

如果沒(méi)有甘油，DNA樣品就會(huì)分散，而不是像在形成DNA階梯時(shí)那樣沉入井中并形成一層。

SDS PAGE中的跟蹤染料

十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS PAGE）是一種適合分離蛋白質(zhì)和氨基酸的技術(shù)，蛋白質(zhì)和氨基酸比線性DNA分子更小且更復(fù)雜。使用聚丙烯酰胺（SDS PAGE凝膠）代替瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳。

溴酚藍(lán)（BPB）作為跟蹤染料添加到樣品緩沖液中，該跟蹤染料沿分離蛋白質(zhì)的相同方向移動(dòng)并劃分其前緣。

DNA結(jié)合染料的作用

可以將DNA結(jié)合染料（例如橙色溴化乙錠）添加到凝膠或電泳緩沖液中。顧名思義，染料附著在DNA分子上。

處理這種誘變?nèi)玖蠒r(shí)格外小心，因?yàn)樗梢越Y(jié)合皮膚細(xì)胞中的DNA。與跟蹤染料不同，溴化乙錠在紫外光下發(fā)出明亮的熒光，使DNA條帶可見(jiàn)。

以上就是上海嘉鵬科技有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于如何示蹤染料在凝膠電泳中起什么作用。

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