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體外重組蛋白表達的蛋白純化標簽如何選擇
日期：2024-10-19 08:55
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摘要：體外重組蛋白表達的蛋白純化標簽如何選擇
那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡單介紹一下關于體外重組蛋白表達的蛋白純化標簽如何選擇。
體外重組蛋白表達技術已經(jīng)滲透到生物學的各個領域。目前，體外重組蛋白表達系統(tǒng)主要有四類：原核表達系統(tǒng)、哺乳動物細胞表達、酵母表達系統(tǒng)及昆蟲細胞表達。表達的一般實驗包括載體構建-表達鑒定-蛋白純化三大步驟。在構建載體階段，除了一些必要的表達元件，還需要考慮的密碼子優(yōu)化和標簽的選擇。選擇合適的標簽不但有利于蛋白的純化，促進蛋白的可溶性，同時也不能影響蛋白的結構功能和下游應用。感謝使用上海金鵬蛋白純化系統(tǒng)Blupadstart進行蛋白純化分離實驗。
本文詳細介紹了幾種蛋白純化標簽，幫助我們更好的設計實驗。
蛋白純化標簽比較
| 融合標簽 | 大?。↘D） | 功能 | 是否切除 |
| HIS | 0.84 | 有利純化，能純化可溶性/包涵體蛋白 | 標簽小，對蛋白無影響 |
| GST | 26 | 增強蛋白可溶性，僅能純化可溶性蛋白，屏蔽毒性蛋白 | 標簽較大，影響較大 |
| MBP | 44.4 | 增強蛋白可溶性，屏蔽毒性蛋白 | |
| NusA | 55 | 增強蛋白可溶性，屏蔽毒性蛋白 | |
| SUMO | 11.2 | 增強可溶性，屏蔽毒性蛋白 |
HIS-Tag（組氨酸標簽）
HIS-Tag蛋白純化的標簽HIS-Tag本身的特性對目的蛋白沒有影響，不會形成二聚體；
- 分子量較小，只有0.84KD，對蛋白的下游應用不會產(chǎn)生影響；
- 原性低，可將純化的蛋白直接注射動物進行并制備抗體；
- HIS-Tag與的轉錄翻譯機制兼容，有利于蛋白表達；
- 可與其他標簽構建雙標簽表達，可用于多種蛋白表達系統(tǒng)，純化條件溫和對蛋白影響較小。
GST-Tag相對分子質量較大，約為26KD，插入在目的蛋白的C末端或N末端，大腸桿菌中常用在N端。GST(谷胱甘肽巰基轉移酶) 蛋白本身是一個在**過程中起到重要作用的轉移酶。一般選擇GST標簽的目的有兩個，一是提高蛋白表達的可溶性，二是提高蛋白的表達量。蛋白表達純化結束后需根據(jù)不同的蛋白應用而確定是否切除標簽，標簽較大，切除與否需根據(jù)下游應用考慮。如果要去除GST融合部分，可用位點特異性蛋白酶切除。檢測方法可用GST抗體或表達的目的蛋白特異性抗體檢測。
HIS-Tag由6-10個組氨酸殘基組成，分子量不到0.84KD，，通常插入在目的蛋白的C末端或N末端。HIS-Tag是目前原核表達常用的標簽，蛋白純化完之后可以不需切除此標簽，也不會對蛋白產(chǎn)生功能影響。同時，蛋白純化步驟簡便，純化條件溫和，對蛋白也不會產(chǎn)生太大影響。
以上就是上海嘉鵬科技有限公司為大家整理總結關于體外重組蛋白表達的蛋白純化標簽如何選擇。
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